摘要
在延长培养的人肝细胞中评估肝脏基因表达随培养时间的变化。人类肝细胞从七个捐助者保持near-confluent collagen-Matrigelsandwich文化基因的信使RNA表达关键肝脏功能量化实时聚合酶链反应在文化时间0(电镀的一天),2、7、9、16、23日,26日,29日,36岁和43天。评估肝细胞的关键基因,包括分化标志物白蛋白、转铁蛋白和转甲状腺素;CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和CYP3A7的细胞色素P450亚型;摄取转运体亚型SLC10A1、SLC22A1、SLC22A7、SLCO1B1、SLCO1B3和SLCO2B1;外排转运蛋白异构体ATP结合盒(ABC)B1、ABCB11、ABCC2、ABCC3、ABCC4和ABCG2;非特异性管家基因次黄嘌呤核糖体转移酶1 (HPRT1)。完善的去分化现象观察2天,有实质性的(> 80%)基因表达的减少在第二天文化中对所有基因进行了除了HPRT1和射流种代号为ABCB1的转运蛋白,ABCC2 ABCC3(<表达式)减少50%,ABCC4表达增加(> 400%),和ABCG2(没有表达下降)。所有>表达下降80%的基因在第7天表达水平升高,在第7天或第9天出现表达高峰,随后表达逐渐下降,持续时间最长为43天。我们的结果提供了培养的人肝细胞在长时间培养后发生再分化的证据。
意义的声明本研究报道,虽然人肝细胞在培养2天后发生去分化,但延长培养时间会根据分化标记物、摄取和排出转运体以及细胞色素P450亚型的基因表达导致再分化。观察到的再分化表明,延长人肝细胞培养(>7天)可能是克服初始去分化过程的一种实验方法,导致“稳定”的肝细胞,可用于需要延长治疗和评估时间的药物特性的评估。
脚注
- 收到了2021年2月16日。
- 接受2021年6月10日。
这项工作没有获得外部资金。
作者(Q.Y., A.P.L.)是体外ADMET实验室公司的员工,该公司是一家冷冻人类肝细胞的商业供应商。
- 版权所有©2021美国药理学和实验治疗学会
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